样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清先按40倍稀释（如在稀释板中加入195μL样品稀释液再加5μL血清，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μL；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μL；样品孔每孔加入样品稀释液90μL，再加入稀释后的血清10μL。

注：样本稀释比例相当于1:200。

4.混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加350μL工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后用干净的吸水纸拍干。

6.每孔加酶标记物100μL（空白孔除外）。盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液、显色液各50μL，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μL，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（OD值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。

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